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大家是如何测定多糖的
季宇彬.《多糖的化学与药理》.北京:人民卫生出版社.2005.5多糖含量测定（1）显色试剂硫酸法：根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物。
苯酚硫酸法生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收；蒽酮硫酸法生成亮绿色溶液，在630nm处有特征吸收；咔哇硫酸法用于测定糠醛酸（伯醇基氧化：形成糠醛酸，斐林（Fehling）试剂可定量。
苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糠醛酸在480nm处）有大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系）。
显色试剂硫酸法方便简单，但需严格控制水解条件。
（2）DNS法：一个能消除还原性杂质干扰的方法（在氢氧化钠和丙三醇的存在下，还原糖能使DNS还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸，在沸水浴中显色2~5min，此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，波长在540nm下有大吸收峰，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。
试验过程中诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果有直接影响）。
利用3,5-二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，于540nm处有特征吸收。
（主要参考文献：董文慧,等.云芝泰中云芝多糖的工业分析方法.中成药,1990,12(2):33.齐香君,等.3,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究.纤维素科学与技术.2004,12(3):17~19）（3）滴定法：有斐林氏滴定法，间接碘量滴定法。
（4）气相色谱法：可定性、定量分析多糖的组分及含量，常采用衍生物法以增加其挥发性。
一般是将多糖酸水解物或甲醇解（用盐酸-甲醇）物，用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）转化为硅烷化产物或二酰化产物进行气相色谱分析。
但乙酰化之前，糖先用KBO4或NaBH4作还原成开链的糖醇化合物较好。
多糖用甲醇解方式把半缩醛甲基化，形成甲基糖苷后再TMS化，异构物减少，有利于分辨。
常以甘露醇或肌醇为内标，用已知的各种单糖作标准。
（5）高效液相色谱法：选用TSK、SW凝胶排斥色谱柱为分离柱，样品经简单预处理，在示差折光检测器中进行检测，以不同分子量的标准右旋糖酐作标准，同时测定样品中多糖的分子量分布情况及其含量。
换算因子F的测定参见附件还阳参多糖的定性分析及含量测定.pdf|||常见的方法有：GPC测定多糖分子量及其分布琼脂糖电泳法HPLC方法测定多糖。
不同的方法会有些差异。
硫酸苯酚法测多糖有什么要特别注意吗
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，接着用紫外分光光度计选择490nm测量吸光度。但是蛋白质无以上性质，应该不影响吧。仅供参考。
苯酚浓硫酸法实验原理
水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定。
中文名
苯酚-硫酸法
原料
多糖
条件
硫酸的作用
浓硫酸
分析纯，95.5%
试剂
1．浓硫酸：分析纯，95.5%
2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
4．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5．15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6．5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7．6mol/L氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8．6mol/L盐酸
操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，沸水浴显色15min以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml15%TCA溶液研磨，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。后滤液保持18毫升左右。（测胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。
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